HPLC和LC/MS 緩沖液選擇指南：總結

· 緩沖液可用于RP-HPLC分離，以控制離子化化合物的保留。通常，我們需要抑制分析物發生電離，以最大化樣品保留。這意味著，不管是
對于酸性或堿性溶劑，其流動相的pH值（理想情況下）應至少低于或高于樣品pKa值2個pH單位。

· 為了實現最佳的緩沖效果，緩沖液的pKa值應在±1個pH單位內。

鑒于樣品和緩沖液的這些特性，應根據表1和表2，謹慎選擇緩沖液。

· 對于LC-UV分析，磷酸鹽和醋酸鹽緩沖液最為常用；醋酸鹽 - 磷酸鹽組合使用，可提供2<pH<8的范圍，這涵蓋了大多數RP-HPLC色譜柱的穩定性。

· 對于LC-MS應用，緩沖液必須易揮發，所以緩沖液的選擇更加有限。
甲酸鹽、醋酸鹽、氨和碳酸氫鹽（表1和2）的各種組合可廣泛適用于LC-MS。

· 對于許多LC-UV和LC-MS方法，較低的pH值比緩沖效果更加重要，因此可以使用0.1％磷酸（UV）或甲酸（MS）酸來滿足這一要求。

鑒于目前高純度色譜柱的低硅烷醇活性，以及低濃度的分析物分子，最終流動相只要含有5-10mM的緩沖液，就能滿足大多數應用的需求。

· 如果通過混合的方式制備流動相（A容器和B容器分別裝有緩沖液和有機溶劑），應將緩沖液濃度控制在25mM以下，可避免緩沖液和有機溶劑混合時產生沉淀。

一些HPLC系統在混合過程中能比其他系統更有效的避免沉淀的產生。如果需要測量沉淀，可將緩沖液逐滴添加到有機溶劑的試管中（反之亦然）。如果觀察到沉淀，則應在混合緩沖液和有機溶劑之前稀釋緩沖液。

· 最后，應注意避免沾染污染物，制備后應過濾緩沖液；如果不使用系統，請勿在系統中殘留緩沖液。

---

參考文獻
1. D.D.Perrin & B. Dempsey, Buffers for pH and Metal Ion Control,
John Wiley, New York (1974).
2. A.P.Schellinger & P.W.Carr, LCGC 22 (2004) 544-548.
3. L. R. Snyder, J. J. Kirkland, & J. L. Glajch, Practical HPLC Method
Development, 2nd ed., Wiley-Interscience, New York (1997).
4. http://www.bi.umist.ac.uk/users/mjfrbn/buffers/Makebuf.asp
5. G.W.Tindall, LCGC 22 (2002) 1028-1032.
6. G.W.Tindall, LCGC 22 (2002) 1114-1118.
7. G.W.Tindall, LCGC 23 (2003) 28-32.
8. M.D. Nelson & J.W.Carr, LCGC 16 (1998) 992-996.

---

作者：

John Dolan是LCGC和LCGC歐洲的“LC故障排除”專欄撰稿人。

在250多期的專欄文章之外，Dolan博士還發表了100多篇HPLC相關的論文。

他的研究領域涵蓋方法開發、色譜柱表征和梯度洗脫等方面。

他還從事與HPLC相關的儀器設計、軟件編寫、合同實驗室管理以及教授HPLC技術等工作。

目前，John是LCResources公司的負責人。

LC Resources是一家致力于色譜技術培訓和色譜問題咨詢的公司。

他在本指南中與我們分享了與緩沖液使用相關的專業知識。

有關John課程的更多信息，請訪問LC Resources網站：www.LCResources.com