色譜負峰原因總結及解析

在液相色譜（HPLC）等分析中，“負峰”是指色譜圖上基線向下產生的尖銳或寬闊波谷，類似倒置的正峰。出現負峰時，實際表示檢測器信號相對于基線減少，而非增加，這屬于色譜異常現象之一。常見原因與解析如下：

1. 檢測器流動相錯配

發生原理：

檢測器流通池中充滿的參考流動相，與進樣后的樣品溶劑或流動相成分不同（如溶劑極性、吸光度）。

比如，采用梯度洗脫時，進樣溶液為強紫外吸收的純甲醇，而流動相主溶劑是甲醇和水的混合物，進樣后檢測器接收到的吸光度比基線值小，出現負峰。

典型場景：

固定波長UV檢測時，進樣溶劑比流動相更強吸光：負峰；

進樣溶劑比流動相弱吸光：正峰（基線升高）。

2. 灰塵、氣泡或污染物的影響

某些污染物注入，改變了檢測池內折光率、流動狀態，使基線突降后恢復，表現為負峰。

氣泡穿過檢測池，短時阻擋了光路，也可見負波動。

3. 衍生反應導致產物信號降低

在線衍生檢測法中，如果反應后產物的檢測信號（如吸光度）比反應前的低，則目標物的出峰為負信號。

比如某些成分與衍生試劑結合后吸收降低，出現負峰。

4. 檢測器極性誤接

某些檢測器如電化學檢測，如果正負極方向接反，則本應正向的電流讀取為負信號。

5. 抑制方法流動相背景變化

離子色譜中常見離子抑制法，如果溶液isocratic與樣品的本底離子濃度變化使檢測器響應降低，會生成負峰。

主要見于電導檢測時。

6. 樣品某組分對基線的吸附/化學反應

樣品組分與流動相反應、柱效或填料上發生吸附，使流動相本底吸收下降，形成負峰。

7. 數據采集、背景校正異常

檢測儀器初始時基線未校正，溶劑峰在校正區出現，信號被算法處理為負。

防范與排查建議

進樣溶劑與流動相保持一致或相近，特別是UV檢測。

流動相徹底脫氣，避免氣泡。

定期清洗流通池、進樣針和進樣通路。

采用合適的流動相比例緩沖，對接雙色流動或梯度切換波長要慎重。

如梯度洗脫，注意樣品溶劑適配梯度初始流動相。

檢測器極性和零點及時校準。

小結

色譜負峰多因檢測池內溶劑本底、進樣溶劑和流動相吸光度不同、氣泡、污染、極性反接、流動相本底波動等原因引起。

本質上，負峰是檢測信號突然低于基線的表現，多為溶劑、參數或操作不當所致。