學(xué)好液相色譜分析（HPLC）既需要系統(tǒng)理論學(xué)習(xí)，也需扎實(shí)的實(shí)驗(yàn)實(shí)踐。以下為你梳理一份詳細(xì)的學(xué)習(xí)、成長(zhǎng)與實(shí)用提升路線，兼顧初學(xué)者和進(jìn)階需求：

一、理論基礎(chǔ)不可少

基礎(chǔ)化學(xué)知識(shí)

有機(jī)化學(xué)、分析化學(xué)、物理化學(xué)基本功。

掌握HPLC原理

分離機(jī)制：吸附、分配、離子交換、分子排阻等

色譜峰、柱效、理論塔板數(shù)、分離度、保留時(shí)間、死體積等基本概念

各類色譜模式（反相、正相、離子交換、手性、GPC等）

了解硬件結(jié)構(gòu)

流動(dòng)相儲(chǔ)備系統(tǒng)、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器（UV、DAD、MS等）、數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)

儀器各部分原理及正確連接、日常維護(hù)知識(shí)

二、實(shí)驗(yàn)與操作技能是關(guān)鍵

規(guī)范實(shí)驗(yàn)操作

稱量、溶液配制、樣品前處理（萃取、過(guò)濾、稀釋等）

正確選擇、使用和保護(hù)色譜柱

流動(dòng)相配制與脫氣、雜質(zhì)控制等

儀器操作與維護(hù)

儀器開(kāi)/關(guān)機(jī)步驟

日常進(jìn)樣、洗脫、數(shù)據(jù)采集

泵、檢測(cè)器、進(jìn)樣閥常見(jiàn)故障、空鼓排氣及小保養(yǎng)

色譜方法開(kāi)發(fā)和參數(shù)優(yōu)化

流動(dòng)相選擇（極性/比例/PH/緩沖鹽/添加劑）

柱溫、流速、檢測(cè)波長(zhǎng)、進(jìn)樣量等優(yōu)化

梯度洗脫與等度洗脫參數(shù)設(shè)計(jì)

三、數(shù)據(jù)解析與問(wèn)題解決能力

色譜圖判讀

峰識(shí)別、保留時(shí)間、峰面積/高、分離度、理論塔板數(shù)等計(jì)算

識(shí)別拖尾、前沖、鬼峰、重疊峰、基線漂移等典型問(wèn)題并初步分析

定性定量分析

標(biāo)準(zhǔn)物線的繪制（外標(biāo)法、內(nèi)標(biāo)法）、最低檢測(cè)限、定量限計(jì)算

樣品未知物定性思路（保留時(shí)間、譜圖對(duì)比、與MS或其他檢測(cè)聯(lián)用）

排查并解決問(wèn)題

常見(jiàn)問(wèn)題如高壓、基線噪聲大、漏液、響應(yīng)波動(dòng)、峰丟失、色譜柱壽命短

確定是系統(tǒng)本身、色譜柱、流動(dòng)相還是樣品處理問(wèn)題

四、理論結(jié)合實(shí)踐——推薦學(xué)習(xí)步驟

系統(tǒng)自學(xué)書(shū)籍

推薦：《現(xiàn)代液相色譜技術(shù)》（呂勁松），《液相色譜基礎(chǔ)與實(shí)踐》（陳昆瑞），《Handbook of HPLC》（英文）

結(jié)合“文獻(xiàn)/公眾號(hào)/色譜論壇”補(bǔ)充常見(jiàn)案例和新技術(shù)

實(shí)際操作與帶教

在本單位實(shí)驗(yàn)室主動(dòng)申請(qǐng)參與HPLC相關(guān)實(shí)驗(yàn)

跟隨有經(jīng)驗(yàn)老師/工程師做2-3個(gè)完整項(xiàng)目，練習(xí)樣品前處理、方法開(kāi)發(fā)、數(shù)據(jù)處理全流程

善用廠商/網(wǎng)絡(luò)公開(kāi)資源

閱讀廠家發(fā)布的操作手冊(cè)、常見(jiàn)故障排查電子書(shū)

加入“色譜經(jīng)驗(yàn)交流群”，與別人技術(shù)切磋，獲取實(shí)際解決方案

方法開(kāi)發(fā)與創(chuàng)新嘗試

實(shí)踐“正相、反相、離子對(duì)、尺寸排阻”等多種模式

嘗試同一樣品在不同柱、不同流動(dòng)相、不同梯度下優(yōu)化，看效果差異，積累直覺(jué)

五、進(jìn)階與個(gè)人特色

MS（質(zhì)譜）、SFC（超臨界流體色譜）、UPLC等新技術(shù)學(xué)習(xí)

復(fù)雜樣品分離、雜質(zhì)研究、痕量檢測(cè)能力提升

撰寫(xiě)方法學(xué)論文、研究報(bào)告，參加同行研討以拓寬視野

六、常見(jiàn)誤區(qū)與建議

不要只懂開(kāi)機(jī)進(jìn)樣、不懂機(jī)制和數(shù)據(jù)判讀；實(shí)際效果很難突破

標(biāo)準(zhǔn)品自己配，真實(shí)樣品親自做，才能養(yǎng)成問(wèn)題敏感度

色譜柱、流動(dòng)相、參數(shù)變化對(duì)結(jié)果的影響，多做多思考

常做知識(shí)歸納筆記（Excel建立自己的“色譜問(wèn)題庫(kù)”/“條件優(yōu)化庫(kù)”）

七、結(jié)語(yǔ)&參考資料

液相色譜分析不難入門，難在精通。 理論和實(shí)踐并重，多做、多問(wèn)、多總結(jié)。最終你會(huì)發(fā)現(xiàn)，HPLC分析是一項(xiàng)兼具規(guī)律性與創(chuàng)造性的技能，也是藥物化學(xué)、分析檢測(cè)、環(huán)境、食品等諸多領(lǐng)域的核心分析工具之一。

參考資源（強(qiáng)烈建議學(xué)習(xí)）

《色譜分析》李發(fā)美主編